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上海奧析UV1901PC紫外分光光度計(jì)細(xì)胞色素C 活力測(cè)定法
更新時(shí)間:2016-08-26 點(diǎn)擊次數(shù):2902

上海奧析科學(xué)儀器有限公司UV1901PC紫外分光光度計(jì)細(xì)胞色素C 活力測(cè)定法細(xì)胞色素C 活力測(cè)定法

試劑(1 )磷酸鹽緩沖液(0 .2 m o l /L ) 取磷酸氫二鈉

71. 6 4 g ,加水使溶解成1000ml,作為甲液。另取磷酸二氫

27. 6 0 g ,加水使溶解成1000ml,作為乙液,取甲液81ml

與乙液1 9 m l ,混勻,調(diào)節(jié)p H 值至7. 3

( 2 )磷酸鹽緩沖液(O .lm d /L ) 取磷酸鹽緩沖液

(0. 2mol/L)500ml,加水稀釋至 1000ml,調(diào)節(jié) pH 值至 7. 3。

( 3 )磷酸鹽緩沖液(0.02mol/L) 取磷酸鹽緩沖液

(0. 2mol/L) 100ml, 加水稀釋至 1000ml, 調(diào)節(jié) pH 值至 7. 3。

(4 )琥珀酸鹽溶液取琥珀酸與氫氧化鉀各4. 72g,

水使溶解成1 0 0m l,調(diào)節(jié)p H 值至7. 3。

(5 )qinhuajia 溶液取qinhuajia 0. 65g,加水使溶解成100ml

后,用稀硫酸調(diào)節(jié)p H 值至7. 3

(6 )去細(xì)胞色素C 的心懸浮液取新鮮豬(牛)心2 只,除

去脂肪與結(jié)締組織,切成條,用絞肉機(jī)絞碎,置紗布兜中,

用水沖洗約2小時(shí)(經(jīng)常攪動(dòng),擠出血色素),擠干,用水洗

數(shù)次,擠干,置磷酸鹽緩沖液(0. Im o l/L )中浸泡約1 小時(shí),

擠干,重復(fù)浸泡1次,用水洗數(shù)次,擠干,置組織搗碎機(jī)內(nèi),

加磷酸鹽緩沖液(0.02md/L)適量恰使豬(牛)心浸沒(méi),搗成勻

漿,離心10分鐘(普通離心機(jī)),取上層混懸液,加冰塊少

量,迅速用稀醋酸調(diào)節(jié)p H 值至約5 . 5 ,立即離心1 5分鐘,

166 .

 

取沉淀,加等體積的磷酸鹽緩沖液(0. lm o l/L ) ,用玻璃勻漿

器磨勻后,貯存于冰箱中;臨用時(shí)取1.0ml, 加磷酸鹽緩沖

(0. lmol/L )稀釋至 10ml

供試品溶液的制備取供試品,加水制成每lm l中含細(xì)

胞色素C 3mg的溶液。

測(cè)定法取磷酸鹽緩沖液(0.2mol/L)5ml、琥珀酸鹽溶

1.0ml與供試品溶液0 .5m l(如系還原型制劑,.應(yīng)加人

O.Olmol/Lqinhuajia 溶液0_ 0 5 m l) ,25ml具塞比色管中,

加去細(xì)胞色素C 的心懸浮液0. 5m lqinhuajia 溶液1. Oml,

水稀釋至1 0 m l,搖勻,以同樣的試劑作空白,照紫外-可見(jiàn)

分光光度法(通則0401),在550nm的波長(zhǎng)處附近,間隔

0.5mn找出zui大吸收波長(zhǎng),并測(cè)定吸光度,直至吸光度不再

增大為止,作為酶還原吸光度;然后各加連二亞硫酸鈉約

5m g ,搖勻,放置約10分鐘,在上述同一波長(zhǎng)處測(cè)定吸光

度,直至吸光度不再增大為止,作為化學(xué)還原吸光度;按下

式計(jì)算:

細(xì)胞色素C 活力=

化學(xué)還原吸光度

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