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上海奧析科學儀器有限公司紫外分光光度計第三法測qing化物
更新時間:2016-08-24 點擊次數(shù):2401

第三法

原理在酸性條件下溴化氰與吡啶聯(lián)苯胺發(fā)生顯色反

應,采用紫外-可見分光光度法測定H ib多糖衍生物中溴化

氰的含量。

試劑 1 )6 0%的吡啶溶液量取吡啶30ml,加水

20ml,搖勻,即得。

(2)2%鹽酸溶液量取鹽酸0.5ml,加水9. 5ml,搖勻,

即得。

(3 )吡啶聯(lián)苯胺溶液取聯(lián)苯胺0.5g,精密稱定,加

60%吡啶溶液50ml使溶解,再加人2%鹽酸溶液10ml,搖

勻,即得。臨用前配制。

對照溶液的制備(1)0. 1 m g /m l溴化氰對照貯備液

取溴化氰10mg,精密稱定,加乙腈適量使溶解,加水稀釋

100ml,搖勻,即得。臨用前配制。

(2 )溴化氰對照工作液(500ng/ml) 精密量取溴化氰對

照貯備液lm l,加水稀釋至200ml,搖勻,即得。

供試品溶液的制備取多糖衍生物適量,配制成lOmg/ml

的溶液,即得。

測定法量取吡啶聯(lián)苯胺溶液2. Oml,加水2. Oml,混

勻,2CTC以下、暗處放置1 5分鐘后,在波長520mn處測定

吸光度,作為空白對照。

量取供試品溶液2. O m l加吡啶聯(lián)苯胺溶液2. Oml,

勻,20X:以下、暗處放置1 5分鐘后,在波長520nm處測定

吸光度。

分別量取溴化氰對照工作液0.1ml、0.2ml0.4ml、

0.6ml、0.8m l、1. Om l于試管中,每管依次加水1.9ml

1.8ml、1.6ml1.4ml、1.2ml、1.0ml,加人P比嗤聯(lián)苯胺溶

2. Oml,混勻,20°C以下、暗處放置1 5分鐘后,在波長

520mn處測定吸光度。

結(jié)果計算以對照工作液中溴化氰的含量(ng/ml) 對其

相應的吸光度作線性回歸,求得線性回歸方程,將供試品溶

液的吸光度代人線性回歸方程,求得供試品溶液中溴化氰的

含量 B (n g/m l) 。

供試品中溴化氰的含量(ng/mg) = |

100

 

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