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紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)測(cè)亞硝酸鹽
更新時(shí)間:2019-03-19 點(diǎn)擊次數(shù):6655

紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)測(cè)亞硝酸鹽

酶將肉制品中的硝酸鹽還原成亞硝酸鹽,再用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)法測(cè)定其中的硝酸鹽和亞硝酸鹽含量。

1.制備樣品溶液

用合適的儀器將實(shí)驗(yàn)樣品混合均質(zhì)。注意樣品溫度不能超過(guò)25℃。如果使用絞肉機(jī),至少要使樣品從機(jī)器中絞兩遍。稱取(到10mg)10g混合均勻的樣品,移入廣口錐形瓶中,加入50ml水,均質(zhì)30~60s。用50mL熱水清洗均勻漿器的軸,連洗液一并移入錐形瓶中,再加入0.2ml溴百里酚藍(lán)溶液,用氫氧化鈉溶液滴定提取液,直到溶液顏色從黃色變?yōu)闇\綠色/灰綠色,然后在沸水浴中加熱15min。在加熱過(guò)程中,反復(fù)震蕩,用勻漿機(jī)將其中的固體顆粒全部溶解。

(在了解掌握此方法時(shí),為了在調(diào)解PH時(shí)熟悉顏色的變化,可先滴定少量樣品提取液,并使用指示劑,然后測(cè)量其PH。生肉產(chǎn)品的PH不能超過(guò)8.5,若超過(guò),其溶液就不能通過(guò)滴加卡瑞試劑后過(guò)濾來(lái)使之純化。如果是熟肉產(chǎn)品,這種危險(xiǎn)則不易發(fā)生,PH可允許達(dá)到9.5.如果使用PH計(jì),則將PH調(diào)到8~8.5。)

檢測(cè)熟香腸,調(diào)節(jié)PH時(shí),顏色變?yōu)闇\綠色(瞬間)為檢測(cè)終點(diǎn)。另一方面,如果檢測(cè)生香腸提取物,這一顏色變化通常比較緩慢,且顏色變?yōu)榛揖G色。如果檢測(cè)帶血的熟香腸,觀察到的顏色與之相似。即使提取液中含有很多的天然色素,通過(guò)幾次練習(xí)這一顏色變化也能被輕易地辨別出來(lái),盡管提取液的顏色會(huì)附加在指示劑的顏色之上,使實(shí)際顏色與理論推測(cè)的經(jīng)常不同。

檢測(cè)生香腸的提取液,經(jīng)過(guò)一定時(shí)間 后可能觀察到相反的顏色變化。這種情況下,滴加氫氧化鈉來(lái)調(diào)節(jié)PH。

冷卻至室溫,將錐形瓶中一定量的提取液移入200ml容量瓶中,加入1號(hào)卡瑞溶液各4mL,每次加完后振蕩容量瓶。用水稀釋至刻度,混合均勻,并用濾紙過(guò)濾,棄去前20mL濾液。剩余澄清的濾液用于檢測(cè)樣品溶液。

亞硝酸鹽含量標(biāo)準(zhǔn)曲線

將作為空白的2.0mL水,2.0mL各濃度亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液分別與1.0mL水、3.0mL顯色劑混合置于試管中,搖勻并在室溫下避光保存。1Ml水和3ML顯色劑,混勻,室溫下避光靜置。30Min 后,紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)參比池里放入水,用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)測(cè)量樣品540nm處的吸光度。4種亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光值對(duì)相應(yīng)的亞硝酸鹽根離子含量(200mL溶液中)做曲線,含量以"亞硝酸根離子質(zhì)量”表示。

硝酸鹽含量標(biāo)準(zhǔn)曲線

在試管中加入0.2ml NADPH溶液,再加入2.0mL作為空白的水或分別加入2.0mL各濃度硝酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液,以及0.8mL硝酸鹽還原酶緩沖液,充分混合均勻,在室溫下靜置1h。再加入3.0mL顯色劑混合物,搖勻,室溫下避光儲(chǔ)存。30Min后,紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)參比池里放入水用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)在波長(zhǎng)為540nm處檢測(cè)其吸光度。用4種硝酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光值對(duì)響應(yīng)的總硝酸鹽、亞硝酸鹽的含量(200mL溶液中)做曲線,含量以“亞硝酸根離子質(zhì)量(mg)表示”

亞硝酸鹽含量的測(cè)定

比色皿中加入2mL的樣品溶液,放入紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)自動(dòng)四聯(lián)樣品池。1Ml水和3ML顯色劑,混勻,室溫下避光靜置。30Min 后,紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)參比池里放入水,測(cè)量樣品540nm處的吸光度。

 

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